Como a maioria dos adolescentes, Peter (Andrew Garfield), tenta descobrir a sua própria identidade e procura também encontrar o seu caminho junto da sua primeira grande paixão, Gwen Stacy (Emma Stone), com quem partilha o amor, o compromisso e alguns segredos.

Quando Peter descobre uma misteriosa mala que pertencia ao seu pai, inicia uma busca para tentar compreender o seu desaparecimento, que o leva diretamente à Oscorp e ao laboratório do Dr. Connors (Rhys Ifans), o ex-sócio do pai.

Como Homem-Aranha, Peter irá entrar em colisão com o alter-ego de Connors, The Lizard. Fazendo uso dos seus super-poderes, Peter terá que tomar decisões que irão mudar a sua vida e que irão torná-lo num verdadeiro herói.